2026年10月，海南大学热带农林学院刘铜教授团队在《Plant Physiology》发表研究，首次揭示生防木霉通过细胞外囊泡向灰霉病菌“投递”milRNA、精准切割其几丁质合成酶基因的跨物种RNAi机制，并利用椰子水碳点纳米载体实现田间防效78.71%，接近化学杀菌剂腐霉利（82.84%）。

创新点一：首次证实木霉milRNA经细胞外囊泡跨物种“沉默”病原菌，锁定精准切割位点。团队从短梗木霉（Trichoderma breve）T069培养液中分离细胞外囊泡，通过透射电镜、PKH26染色、纳米颗粒示踪及Evp1标记蛋白共定位等多重证据证实其纯度与特异性；证实囊泡保护Tri-milR29进入灰霉病菌，过表达该分子可提升抑菌能力，病原菌菌丝出现缠绕穿孔。通过靶标验证显示，Tri-milR29同时靶向灰霉病菌的BcCHS7与BcCHS6两个几丁质合成酶基因；而由生防菌天然产生、并靶向病原菌几丁质合成酶基因的sRNA，此前尚未见报道。双靶点带来了明显的协同效应，其切割位点不同于植物 miRNA 常规位置，属于非常规位点，表明跨物种 miRNA 调控机制比现有认知更复杂。

图 1 ｜ 木霉T069细胞外囊泡（EVs）的分离鉴定及Tri-milR29的跨域递送证据

图 2 ｜ Tri-milR29靶向调控灰霉病菌BcCHS7与BcCHS6及切割位点鉴定

创新点二：椰子水变身“纳米载药车”，破解dsRNA稳定性与吸收瓶颈。针对外源dsRNA易被核酸酶降解、病原菌吸收效率低的难题，团队以椰子水为碳源合成5-8 nm碳点，经支化聚乙烯亚胺修饰构建CPP纳米载体，凝胶电泳确定2:1为最佳负载质量比，红外光谱提示复合由氢键和静电作用介导。RNase实验显示纯dsmilR29在5分钟内完全降解，而CPP-dsmilR29在30分钟后仍可检出；FAM标记证实CPP显著促进dsmilR29在菌体内积累，并伴随病原菌生长下降。该载体绿色、可降解、原料易得为RNA农药低成本规模化制备提供了新思路。

图 3｜ 基于椰子水的碳纳米材料高效负载dsmilR29

创新点三：田间防效78.71%逼近化学杀菌剂，SIGS策略为绿色防控提供新选择。与依赖转基因植物的寄主诱导基因沉默（HIGS）路线不同，喷施诱导基因沉默（SIGS）无需改造作物基因组，更具备落地前景。病害防效试验中，CPP-dsmilR29对番茄、草莓和葡萄的防效较单用dsmilR29提高42.86%、20%和56%；盆栽试验将番茄发病率降至22.5%，防效68.75%，较单用dsmilR29提高37.5%，且单独施用CPP与未处理对照无显著差异，表明防效来自RNAi效应而非载体非特异性保护。田间试验显示，处理后第35天病情指数仅5.67，防效达78.71%，接近腐霉利处理（82.84%）。研究团队表示，dsRNA-CPP体系有望进一步推广至其他植物—病原菌系统，为化学农药减量与农业绿色转型提供新的技术路径。

图 4 ｜ CPP纳米载体递送dsmilR29实现对灰霉病的高效防控

该研究由海南大学博士生尹雅萍、薛鸣，周口师范学院刘震副教授，海南大学张雪巍副教授及海南师范大学Raja Asad Ali Khan老师共同为担任第一作者，海南大学刘铜教授为通讯作者。研究获国家自然科学基金（32472639）、海南省科技人才创新基金（KJRC2023C42）和海南省自然科学基金（324MS016）资助。

原文链接 https://doi.org/10.1093/plphys/kiag715

图文：尹雅萍

初审：刘铜，邓勤

复审：盘毅

终审：朱国鹏